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描述：变性组织细胞裂解缓冲液，提供完整的组织、细胞总蛋白制备方案。变性细胞裂解缓冲液(Denaturing Lysis Buffer，#C1052)用于组织、细胞变性裂解提取总蛋白，适宜于如下几种情况：(1) 抗原是不溶性蛋白，如不溶性的细胞骨架和膜蛋白或高度疏水蛋白；(2) 抗原位点隐匿于蛋白高级折叠结构之中；(3) 易集聚沉淀的蛋白；(4) 体外翻译产生的蛋白。

储存：室温

制备细胞裂解产物
1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）； 
2. 每50～100 ml PCV加入5倍体积变性组织细胞裂解缓冲液（250~500 ml）,冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
3. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；
4. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物
1. 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
2. 加入 0.5-1 ml 预冷 变性组织细胞裂解缓冲液；
3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
4. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
5. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
6. 20％的甘油保存于 -70 oC 或-20 oC。

注意： 
1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
3. 在该RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂。