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RIPA裂解液 (RIPA Lysis Buffer)#P1053+(加强型)
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产品名称：RIPA裂解液 (RIPA Lysis Buffer)#P1053+(加强型)
产品规格：100 ml
产品货号：p1053
产品价格：￥ 135.00/盒
所属厂家：北京普利莱
更新时间：2013.07.12
销售单位：西安润德生物技术有限公司 |
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 产品详细介绍 |
| RIPA裂解液 (RIPA Lysis Buffer)#C1053 |
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描述：
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，可能是经典但最常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA Buffer制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作，适用于大部分抗原表位的检测，特别适用免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质之间的相互作用。我们提供的RIPA Buffer的成分为：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS，适于绝大多数蛋白-蛋白相互作用的免疫共沉淀。
组成： 100 ml RIPA Buffer：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.
保存：−20 ºC or 4 ºC
培养细胞裂解 ：
1. 贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍。悬浮细胞，离心收集，PBS洗一遍。洗去血清中lgG干扰对免疫共沉淀是有益的，但对Western Blot可能并非必要。
2. 通常每106个细胞可加0.1 ml RIPA buffer。这大致相当于6孔板的单孔(1-2 x106细胞)加入0.1~0.15 ml，或一个75 cm2培养瓶(1-2x107细胞)加1~2 ml。裂解液和细胞应充分接触。如果RIPA buffer不足量，细胞裂解效率将会降低。
3. 冰上放置数分钟，细胞裂解。可用枪头轻轻吹打。轻轻倾斜培养皿使裂解产物流向瓶皿的一边或一角，然后将之转移到1.5 ml离心管。剧烈振荡30秒。
4. 12,000×g，4 ºC离心5分钟，取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
组织块裂解：
1. 组织剪切成细小的碎片。每100毫克组织加入1 ml RIPA裂解液。用玻璃匀浆器匀浆上下手动匀浆20次。
2. 将匀浆物转移到1.5 ml离心管。
3. 12,000×g，4 ºC离心5分钟，取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
说明：
1. 裂解液临用前可新鲜加入最终浓度为1mM的PMSF或其它蛋白酶抑制剂。所幸的是对大多数蛋白质而言，不加蛋白酶抑制剂可能也不会有明显影响。
2. RIPA裂解液中蛋白样品含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法但可用BCA法或改良Lowry法测定蛋白浓度。我公司有上述三种蛋白浓度测定试剂盒。
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