简介

DAF-FM DA即3-Amino,4-aminomethyl-2’,7’-difluorescein,diacetate，也称DAF-FM diacetate或4-Amino,5-aminomethyl- 2’,7’- difluorescein, diacetate。 DAF-FM DA是最新一代用于一氧化氮定量检测的荧光探针，比以前比较常用的一氧化氮荧光检测探针DAF-2 diacetate有多方面的改进。首先，DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比，最后和一氧化氮反应形成的荧光产物受pH值的影响小，在pH值大于5.5时不受pH值的影响。其次，DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比，前者产生的荧光更加稳定，不容易淬灭，这样更加便于检测。另外，DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比，前者对一氧化氮的检测灵敏度更高，相同条件下检测灵敏度可以提高接近2倍，最低检测浓度可以达到3nM。 DAF-FM DA可以穿过细胞膜(cell-permeable)，进入细胞后可以被细 胞内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的DAF-FM 。DAF-FM本身仅 有很弱的荧光，但在和一氧化氮反应后可以产生强烈荧光，激发波长为495nm，发射波长为515nm。DAF-FM DA检测一氧化氮的机制可以参考上图。任何可以检测fluorescein的仪器，包括荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于该荧光探针的检测。右图为DAF-FM在不同浓度一氧化氮存在时的发射荧光扫描图谱(fluorescence emission spectra)。 DAF-FM DA的分子量为496.4，分子式为C25H18F2N2O7，HPLC分析纯度大于98%。 本DAF-FM DA为溶解于DMSO的淡黄色溶液，浓度为5mM。 本荧光探针适合于检测细胞内的一氧化氮水平，可以进行实时检测。如果收集细胞后再装载探针，通常至少可以检测100个样品。